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要想蛋白活性好，溶解稀释要记牢！
发布时间：2021-11-11 15:31 | 点击次数：
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01 查看说明书
1. 确定合适的溶解液收到产品后，首先应查看说明书中细胞因子储存和处理的方法。见下图： 
2. 确定合适的温度 图中的表格给出了细胞因子在冻干粉（lyophilized） 状态下的溶解（reconstituted）和稀释 （extended storage）的储存温度以及时间，您可以根据自己的实际需要选择 
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02 溶解
1. 离心 收到的管子内为冻干粉，开盖前要快速离心 10000-12000rpm x 30s。 2. 溶解 根据说明书红色标识地方的描述，选择合适的溶解液，溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性，保证产品质量。请不要使用非建议溶液溶解。 目的：使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。 注意：不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋，可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢，需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使充分溶解。 3. 短期储存 溶解后的蛋白溶液可以在 2-8 度储存 1 周 4. 长期储存 如果您的实验，一周内不能用完。必须将第 2 步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。(详见：03 稀释) 目的：对已溶解一步的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点，且可以在低温下维持细胞因子的稳定。 |
03 稀释 1. 配置 配制含 0.1%BSA 或 10%FBS 或 5% 海藻糖的稀释液备用（确保无菌），这三种稀释液的配制的 Buffer 可以用 PBS 或者细胞基础培养基。使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液，稀释浓度根据您的使用浓度确定，不要低于 10ug/ml。即可分装成小管，冻存在 -20--80 度 2. 使用方法 使用时取用一支冻存的细胞因子，加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。 |
04 你问我答 1. 为什么会有这么多溶解方法 蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是 pH 值和离子强度。 PeproTech 的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试，说明书上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的 pH 值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。 2. 高于或低于该浓度范围会有什么问题呢 首先，细胞因子或蛋白会不稳定，即很容易出现活性下降的现象。 其次，高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解。再者，高于或低于该浓度范围，蛋白可能会出现聚集（aggregation），最终结果还是部分蛋白未溶解，导致蛋白活性的减弱。 3. 若想保证溶解液与冻干粉充分混匀，以实现细胞因自或重组蛋白的完全溶解，该怎么办 多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的，一般我们用移液枪的枪头轻吹几下，即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。 对于不易溶解的细胞因子或蛋白，PeproTech 会在说明书中进行备注 （Note）。如在重组人 IL-13 （产品编号：200-13）的说明书中您会看到：Slow to dissolve（缓慢溶解），在重组人 IL-11 （产品编号：200-11）的说明中会看到：This solution is slow to dissolve（该溶液溶解缓慢）。这种情况下，您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床（shaker）上低速摇一段时间，促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。有些蛋白，如重组人 IL-13 Variant（产品编号：200-13A）虽然难溶，但却不需用摇床来加速溶解。其说明书上的备注为：Allow the reconstituted vial to sit at 4 度 for at > 2 hours before use. （将重悬液在 4 度静置 2 小时以上）。 |
05 注意事项
1. 一定要用推荐的溶解液溶解冻干粉 2. 一定要溶解到指定浓度 3. 一定不能振荡（vortex） |
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上述细胞因子溶解稀释方法，针对 PeproTech 细胞因子系列产品定制研发，如需技术支持，欢迎垂询。
美国 PeproTech （派普泰克）公司成立于 1998 年，总部位于美国新泽西洲。 PeproTech 公司是世界上最大的重组细胞因子和蛋白生产商之一，共生产 500 多种重组人、小鼠、大鼠细胞因子和蛋白，因其较高的性价比而受全球各实验室的青睐。
PeproTech Inc. 的产品涵盖免疫调节蛋白、白介素、集落刺激因子、生长因子、化学趋化因子、干扰素、脂联素、成纤维生长因子、转化生长因子、肿瘤坏死因子、神经营养素和防御素等诸多生命科学研究领域中重要的生物活性分子。2014 年 PeproTech 推出流式品牌 BioGems， BioGems 目前已有一千多种流式产品，涵盖多种荧光标记的流式抗体、具有生物活性的功能性抗体，以及流式细胞术辅助试剂，如溶血剂和破膜剂等，并不断有新产品发布。
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| PeproTech （派普泰克）中国代表处 江苏省苏州工业园区星湖街 218 号生物纳米园 A1 北座 M10 邮编：215123 电话：0512-6832 5983 全国免费热线：4000053055 企业 qq：800053055（在线咨询） Email：china@peprotech.com Website：www.peprotech.com |